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詳解細胞毒性檢測方法及影響實驗關鍵因素

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  MTT法又稱MTT比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。
 
  在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
 
  影響實驗關鍵因素:
 
  細胞消化。若消化出現問題,則會影響細胞的活性,進而影響OD值。對于 MDA-MB-231、MCF-7、HS-578T 等一系列容易消化的細胞,消化時胰蛋白酶中不添加EDTA,消化時也僅需胰酶浸潤數秒即可。然而,對于SW480等一系列難以消化的細胞,胰蛋白酶中需添加濃度為0.25%的EDTA; 接種數量。對于細胞接種數量要適宜,過小或過大均會影響OD值(過小細胞容易死亡,過大細胞容易生長擁擠)。
 
  結晶物的溶解。加入DMSO,放入37℃孵箱內孵育10~20 min,有助于DMSO對紫色結晶物的溶解。培養(yǎng)液的棄去。或用移液器吸取孔內培養(yǎng)液,吸取的時候要注意移液頭要緊貼孔內側壁吸取,不要觸碰底部的紫色結晶?;驅?6孔板倒扣于濾紙上來吸取孔內的培養(yǎng)液。
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