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mtt法檢測細胞毒性

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  一些研究人員甚至將 MTT 檢測與流式細胞術(shù) (FACS)結(jié)合使用,以從非活細胞中分選活細胞。然而,這種情況并不常見,并且有更好的 FACS 染色劑,例如碘化丙啶 (PI)。
 
  細胞效價藍、臺盼藍和 ATP 檢測
 
  如上所述,MTT 測定實際上是一種代謝測定,因為 MTT 分子需要進入細胞并使用 NADPH 轉(zhuǎn)化為甲臜。雖然 MTT 新陳代謝的確切機制尚不清楚,但這意味著線粒體需要完好無損并發(fā)揮作用。所以,如果你添加一種會降低線粒體效率的細胞毒性物質(zhì),你可能會得到奇怪的結(jié)果。在這種情況下,了解其他活/死檢測也很有用。研究中使用的其他主要細胞活力測定包括:
 
  細胞滴度藍:與 MTT 測定類似,該測定涉及將細胞與刃天青(藍色)一起孵育,并在細胞代謝后形成試鹵靈(粉紅色)。通常代謝需要 1-4 小時,但它比 MTT 檢測靈敏得多,因為您可以通過熒光 (Ex/Em 560 nm/590 nm) 測量產(chǎn)物。這種檢測的主要優(yōu)點是您不需要在 DMF/SDS 中重新溶解產(chǎn)品,因此它更簡單。這也是一個很好的高通量檢測!
 
  臺盼藍排除法:如果您沒有分光光度計,那么將臺盼藍染色法與顯微鏡一起使用很簡單。因為臺盼藍是一種帶電染料,它不能透過活細胞。因此,只需用臺盼藍孵育細胞并在顯微鏡下觀察,您就可以直觀地確定活細胞的數(shù)量(未標記)、非活細胞的數(shù)量(藍色)和受損細胞的數(shù)量(略帶藍色)。計算不同視野中的單元格數(shù)量,您就完成了!活力只是活細胞除以細胞總數(shù)的比率。這種方法的缺點是您只測試細胞的膜完整性。你不知道這些細胞是真的無法存活還是只是受到了一點點損壞。
 
  ATP 測定:當(dāng)細胞無法存活時,它們不能再制造 ATP,而有活力和快樂的細胞可以制造 ATP。此外,一旦細胞死亡,ATP酶就會迅速分解ATP。使用這些信息,很容易看出為什么基于 ATP 的分析會非常有效。理論很簡單——裂解細胞,阻止 ATP 酶水解 ATP,加入螢光素酶和螢光素。您將獲得數(shù)小時的出色發(fā)光信號!
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